五月 2007 - 文章

再谈全基因合成

理论终于上升到实践,呵呵,用两步法PCR合成400bp的基因成功!

采用前面文献介绍的两步法思路,做了一些改动(简化),去除了回收和T7核酸内切酶I酶切步骤。

测序100%正确,真是让人开心!这个实验中的小插曲让我对PCR反应和Pfu酶又有了新的认识(这个暂时保密,呵呵)。

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In-Fusion技术

只要PCR产物和载体的末端有15个相同的碱基就可以利用In-Fusion酶在30min内连接起来。

打算好好考虑一下它的应用,不仅仅是方便。

还是详细介绍一下:

如图所示,In-Fusion技术已经开发出2.0版试剂盒,只要PCR产物和线性载体的末端有15个相同的碱基,这时不需要纯化PCR产物,也不用双酶切,只要将两者混合,加入Cloning Enhancer试剂和In-Fusion酶,30分钟就可以连接成功。

2.0版的试剂盒的效率是老产品的5倍,可以连接<500bp直至12kb的片段。

以上译自Clontech的网站:http://www.clontech.com/products/detail.asp?tabno=2&product_id=162275

个人以为除了它连接速度快、简便以外,有以下优势:

1. 当目的片段中带有酶切位点时,无法用双酶切的方法克隆,用这个方法是最佳选择。

2. 不像TOPO方法需要引入一段多余的序列,这个方法产生的产物很干净。

3. 一些短片段PCR回收困难,这个方法也许更好(这点只是我猜想,不知道是不是如此)。

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